說(shuō)到核酸檢測(cè),首先你要了解生物實(shí)驗(yàn)室。根據(jù)危險(xiǎn)度等級(jí),包括傳染病原的傳染性和危害性,國(guó)際上將生物實(shí)驗(yàn)室分為P1、P2、P3和P4四個(gè)等級(jí)。P1-4實(shí)驗(yàn)室可承擔(dān)的工作也根據(jù)這一安全等級(jí)進(jìn)行劃分,其嚴(yán)格等級(jí)從低到高。P3實(shí)驗(yàn)室又稱防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,適用于處理對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危害性,通過(guò)直接接觸或氣溶膠使人傳染上嚴(yán)重甚至是致命的疾病,或?qū)?dòng)植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子,通常有預(yù)防和治療措施。
核酸檢測(cè)是極其靈敏且精密的實(shí)驗(yàn),核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室有特殊的環(huán)境要求,不是隨便開(kāi)辟個(gè)地方就能檢測(cè)的。為什么現(xiàn)在要建立專門(mén)的方艙實(shí)驗(yàn)室才能進(jìn)行核酸檢測(cè),就是這個(gè)道理。
那么,核酸檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)是如何進(jìn)行的?這個(gè)過(guò)程大致可分為:檢測(cè)前的準(zhǔn)備工作——核對(duì)樣本信息——樣本滅活——開(kāi)蓋加樣和核酸提取——PCR反應(yīng)體系配制——核酸擴(kuò)增檢測(cè)——檢測(cè)完成——高壓滅菌。
檢測(cè)前
打開(kāi)樣本前,檢測(cè)人員需穿戴好個(gè)人防護(hù)裝備,如防護(hù)服、口罩、護(hù)目鏡、面屏、雙層醫(yī)用乳膠手套、防水靴套,每個(gè)步驟不能出錯(cuò)。
檢測(cè)中
1、核對(duì)樣本信息。
標(biāo)本都是在嚴(yán)密包裝下被護(hù)送到實(shí)驗(yàn)室的,需要實(shí)驗(yàn)室簽收,錄入信息系統(tǒng)。這個(gè)步驟需要一個(gè)一個(gè)拆包裝,而且是雙層密封包裝,并且每一個(gè)都要消毒處理,做好生物安全防護(hù)。消毒完畢后對(duì)被檢測(cè)樣本的姓名、年齡、性別等信息進(jìn)行核對(duì)。然后將標(biāo)本的信息錄入系統(tǒng),對(duì)接健康碼。
這期間,全手工,不比取樣快多少,特別是在海量標(biāo)本里,還要保證0錯(cuò)誤,不能張冠李戴,或者錄信息錄到最后,發(fā)現(xiàn)少了或者對(duì)不上數(shù),又得再找一遍。
2、將樣本放在水浴箱中進(jìn)行半個(gè)小時(shí)的56℃的高溫滅活,使病毒蛋白失去生理活性,在不影響病毒蛋白的基因序列的前提下,使病毒失去感染、致病和繁殖能力,保證檢測(cè)過(guò)程的安全性。
3、實(shí)驗(yàn)員拿到滅活后的樣本時(shí),第一步是進(jìn)行振蕩,盡量讓拭子上的病毒洗脫在培養(yǎng)基溶液中,第二步是進(jìn)行5分鐘的沉淀。第三部進(jìn)行開(kāi)蓋加樣,這一步必須實(shí)行人工操作,并且需要兩人高度配合完成。一人擰開(kāi)樣本罐的蓋子,另一人拿微量移液器在樣本罐中吸取微量溶液,放到另一個(gè)提取管里,再擰上管蓋。
核酸提取可以使用儀器輔助,但由于比對(duì)需要,往往要加以人工操作,需要反復(fù)進(jìn)行離心、加試劑、洗滌等10多個(gè)步驟。其中,需要打開(kāi)管蓋的操作就達(dá)7次以上,完成一例人工核酸提取需要50分鐘左右。
4、走出核心試驗(yàn)區(qū),開(kāi)始進(jìn)行PCR反應(yīng)體系配制,將提取的病毒核酸加入到核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑中。
5、將配制好的PCR反應(yīng)物放置在熒光定量PCR儀上。在電腦上設(shè)置PCR反應(yīng)條件,運(yùn)行儀器,開(kāi)始核酸擴(kuò)增檢測(cè)。
這個(gè)過(guò)程需要1-2個(gè)小時(shí),而且儀器一旦啟動(dòng)擴(kuò)增程序是不能停下來(lái)中途添加新的標(biāo)本的,必須要等這一批的結(jié)果擴(kuò)增完成后,才能進(jìn)行下一批標(biāo)本的擴(kuò)增。所以,這也是為什么核酸檢測(cè)不能做到隨到隨測(cè)的原因之一。
檢測(cè)后
檢測(cè)人員需要實(shí)時(shí)關(guān)注檢測(cè)情況,約1.5小時(shí)后,核酸擴(kuò)增完成,進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果判讀。然后工作人員將結(jié)果上傳信息系統(tǒng),群眾就可以查詢結(jié)果了。至此,歷經(jīng)大概4小時(shí),整個(gè)流程完成。
最后,也是非常重要的一步就是對(duì)污染物的高壓滅菌處理。實(shí)驗(yàn)過(guò)程產(chǎn)生的污染物通過(guò)高壓滅菌后,按普通醫(yī)療垃圾處理。
可以說(shuō),核酸檢測(cè)的過(guò)程是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,需要實(shí)驗(yàn)人員付出艱苦的勞動(dòng),同時(shí)還需要保證實(shí)驗(yàn)的安全性、科學(xué)性,這樣才能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。
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